PDF-версия статьи |
В связи со всем выше изложенным, для того, чтобы изучить генетическое разнообразие, а также исследовать филогенетическую структуру орловской рысистой породы лошадей, мы сперва, оценили информативность предложенных ранее молекулярных маркеров на примере одной племенной кобылы орловской рысистой породы. В исследовании использовали ДНК кобылы Попутки (Паводок – Плитка), номер животного по ГПК – 20137, линия Барчука, Хреновской конный завод.
Микросателлиты. Молекулярно-генетический анализ производился с использованием 15 локусов, рекомендованных ISAG/FAO (International Society for Animal Genetics/Food and Agricalture organisation). Для типирования аллелей в данных локусах использовали следующие пары праймеров: AHT4 (F), ASB2 (R), COR07 (F), HMS1 (R), HMS3 (R), HMS6 (F), HMS7 (R), HTG4 (F), HTG7 (R), LEX33 (R), TKY301 (F), TKY325 (F), TKY333 (F), TKY337 (F), TKY341 (R) [1]. В круглых скобках указан праймер, с которым ставили реакцию секвенирования (F-forward и R-reverse, соответственно). В результате проведенного анализа последовательности ДНК, полученной после секвенирования, установлено, что все перечисленные праймеры распологаются вокруг микросателлита типа AC/TG. Обнаружено, что длина микросателлитного повтора AC/TG варьирует от 9 до 28 единиц в зависимости от локуса. 10 из 15 изученных локусов находились в гетерозиготном состоянии и 5 в гомозиготном, соответственно. У гетерозигот разница в количестве микросателлитных повторов у двух разных аллелей не превышала 1-7 единиц, что может указывать на неравный кроссинговер или генную конверсию в изученных локусах.
мтДНК. Для целей подбора условий гаплотипирования митохондриального генома и последующего исследования филогенетических связей в популяции орловской рысистой породы лошадей мы также амплифицировали участок D-петли (control region 15469-16660 п.н.) митохондриальной ДНК протяженностью 510 п.н. (15343-15852 п.н. согласно RefSeq NC_001640.1 INSDC X79547.1) с праймерами CGC ACA TTA CCC TGG TCT TG (forward) и GAA CCA GAT GCC AGG TAT AG (reverse)[2]. Реакцию секвенирования ставили с reverse-праймером. Полученная после секвенирования последовательность ДНК составила 430 п.н., что достаточно для выявления гаплотипов митохондриальной ДНК в популяции лошадей.
Таким образом, полученные результаты по микросателлитному и мтДНК анализу племенной кобылы, позволяют сделать вывод об информативности и пригодности данных маркеров для изучения генетического разнообразия орловской рысистой породы лошадей.
Работа выполнена при финансовой поддержке грантов Президента Российской Федерации для молодых российских учёных (проект № МК-113.2011.4) и РФФИ (проект № 11-04-01515-а). Литература: 1. Prystupa J.M. et al. 2012. Animal, 6:1, 19–30.; 2. Xu,X. and U.Amasson, 1994. Gene,148, 657-662.
ОПУБЛИКОВАНО
Мысина В.А., Былино О.В., Мысин М.А. ОЦЕНКА ИНФОРМАТИВНОСТИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ПРИ ИЗУЧЕНИИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ ОРЛОВСКОЙ РЫСИСТОЙ ПОРОДЫ ЛОШАДЕЙ. // Современные проблемы науки и образования - 2012.-№6. (приложение "Биологические науки"). - C. 21